腺病毒包装原理介绍

腺病毒是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒，由252个 壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。衣壳里是线状双链DNA分子，基因检测怎么做，两端各有长约100bp的反向重复序列。人体腺病毒 已知有33种，分别命名为ad1-ad33，研究详细得是ad2.

腺病毒是一种无包膜的球型结构的病毒，南通pcr，遗传物质为线型 双股DNA形式。腺病毒的特点：（1）gan染范围广对人致病性低；（2）对增殖和非增殖细胞均具有gan染性；（3）能有效进行增殖；（ 4）病毒滴度高；（5）不整合到染色体中，无插入致突变性；(6)外源基因装载容量大。由于腺病毒的这些特点使其广泛地应用于体 外基因转导、体内接种yi苗、和基因zhi疗等各个领域。

实验方法

1.获得目的基因序列；

2.构建病毒表达载体质粒；

3.表达载体质粒和包装质粒重组；

4.gan染HEK293，包装出病毒；

5.病毒扩增、浓缩；

6.滴度测定。

RIP

技术概述

RIP是研究体内蛋白与RNA互作的重要技术。该技术先用甲醛等试剂交联细胞内的“蛋白-RNA”互作复合物，裂解细胞后，用靶蛋白特异的抗l体(或标签抗l体)做免l疫沉淀，获得“靶蛋白-RNA”互作复合物，去交联分离其中的RNA;针对预测的靶蛋白结合RNA的序列设计引物，

做qPCR实验，验证预测的RNA是否与靶蛋白有结合，或者将分离出来的RNA做高通量测序，筛选到可能与靶蛋白结合的RNA。

技术流程

细胞交联-→细胞裂解-→免l疫共沉淀→去交联→RNA分离→建库→高通量测序(或qPCR)。

13.合成的引物5"端是否有磷酸化

答：合成的引物5"为羟基，没有磷酸基团。如果需要您可以用多核苷酸激酶进行5′端磷酸化，或者要求引物合成公司合成时直接在5′或3′端进行磷酸化，需要另外收费。

14.引物片段退火后不能连接到载体上是什么问题？

连接反应需要引物的5’磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上，引物需要磷酸化。磷酸化的产物如果还不能连接载体上，荧光定量pcr，需要检查载体的酶切效果，基因检测多少钱，需要改善引物退火的条件。SiRNA分子具有特殊的对称结构，退火的难度较大，退火时需要提高退火温度。

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