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细胞实验外包 四川细胞实验 南京英瀚斯
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发布时间: 2023-01-09 18:27
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二、脂质体转染操作步骤

1、操作步骤 [方法一]:

(1) 细胞培养:取 6 孔培养板 (或用 35 mm 培养皿),向每孔中加入 2 mL 含 1~2×105 个细胞培养液,37℃ CO2 培养至 40%~60% 汇合时 (汇合过分,转染后不利筛选细胞)。

(2) 转染液制备:在聚苯乙稀管中制备以下两液 (为转染每一个孔细胞所用的量)A 液:用不含培养基稀释 1-10 μg DNA,终量 100μL,B 液:用不含培养基稀释 2-50 μgLR,终量 100μL,轻轻混合 A、B 液,室温中置 10-15 分钟,稍后会出现微浊现象,但并不妨碍转染 (如出现沉淀可能因 LR 或 DNA 浓度过高所致,应酌情减量)。

(3) 转染准备:用 2 mL 不含培养液漂洗两次,再加入 1 mL 不含培养液。

(4) 转染:把 A/B 复合物缓缓加入培养液中,摇匀,37℃ 温箱置 6~24 小时,吸除无转染液,换入正常培养液继续培养。

(5) 其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。

注意:转染时切勿加,对转染效率有很大影响。



大鼠gu髓间充质gan细胞的分离

操作方法

(1 )取SD大鼠( 2周龄),颈椎脱臼法处死后立即用75%乙醇浸泡,移入超净工作台内,用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。

(2)碘酒擦拭四肢,再用酒精棉球擦拭,无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨,剔除骨头表面肌肉,四川细胞实验, PBS溶液冲洗两遍。

(3 )从中间剪断股骨和胫骨,用2ml无菌注she器吸取DMEM/F 12溶液冲出gu髓细胞多次,再用针头吹打,吸管吸入离心管内,细胞实验外包,1000r/min离心5min,弃上清,用PBS重悬细胞。

(4 )缓慢将细胞悬液加入预先装有5mL淋巴细胞分离液的15mL离心管内,保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层,细胞实验外包哪家好,注意不要搅动液面,保持二者分层界面。

(5 ) 2000rpm离心15-25min,离心后溶液分4层,细胞实验外包费用,吸取中间骨sui基质细胞层(白色浑浊状), PBS洗三次。

(6)用含15%胎牛xue清及青链mei素的DMEM/F 12以106/mL的细胞浓度接种于25cm2培养瓶中, 置37°C、5%CO2恒温培养箱中培养。

( 7 ) 24小时后弃去培养液(看细胞贴壁情况),PBS冲洗2-3次去除末贴壁细胞,加入培养液继续培养。以后每3d半量换液1次,-般10d细胞生长融合。

(8 )经0.25%胰酶消化,1 : 2传代,其后一般3-5d传代1次,选取生长良好的第三代细胞进行后续实验。





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