注意事项

1. 针头大小与动物的种类有关，t 同时针头一定要磨钝。

2. 检查灌注泵的运作情况，一定排出管子的气泡和空气，防止空气栓塞。

3. 经腹腔暴腔，先清楚升主动脉外面的脂肪组织和心外膜组织。

4. 将针头经左心室插入升主动脉（颜色变白的哦），并用钳子固定。

5. 解开右心耳，同时开启灌注泵。注意，不要随便揭开心脏的其他部位，否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功，尤其。

6. 将 4 度的生理盐水（好已动物的发白为标准，海南动物实验，我们实验室的大鼠约用 250ml）和多聚甲醛 (根据所取得材料而定) 依次灌入。

7. 整个过程均应将动物放在冰上，以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。

的定义是持续两年或以上，每年里超过三个月的有痰咳嗽。大部分患者有慢性阻塞性。吸烟是常见的致病原因，其他原因包括空气污染和基因（后者重要性较低）。的是戒烟、预防、复康、吸入性剂和类固醇。一些患者需要长期吸氧或移植。

一、实验材料

LPS（Sigma公司）

SD大鼠（6周龄）

二、实验方法

SD大鼠用10%水合氯醛，仰卧固定于操作台，使用手术剪剪开颈部皮肤，暴露气管，将LPS（1mg/kg）注入气管，动物模型实验，饲养三周。

因 SP 是单只大鼠进行实验且在实验中大鼠的活动空间受限，故有学者认为以上的临床与实验室表现可能与大鼠的群体隔离或活动空间受限有关，进一步研究发现，在实验前群体饲养的动物当与群体隔离后也会出现攻击行为增加，血浆中 CORT 增加，功能抑制等表现。大鼠活动空间受限也可引起血浆中 CORT 的水平的增加，这些结果与单平台睡眠剥夺实验中见到的类似，可以做动物实验的公司，为克服SP 中大鼠与群体分离及活动空间受限的缺点，在 SP 基础上进一步发展为多平台睡眠剥夺法。

1.2多平台睡眠剥夺法

M P法于1981年先应用在大鼠睡眠剥夺实验中，在 M P中为扩展大鼠的活动空间将台由 SP 中的 1 个增加至 7 个，仍将1只大鼠放在台间进行睡眠剥夺试验，因大鼠可以在 7个台间自由活动，故活动范围较 SP 中有明显增大。经实验比较，在M P中反映应激增强的一些指标，如上腺重量增加和胸腺重量减少仍然存在，甚至在大鼠血液中 ACTH %CORT 的增加及上腺重量的增加较SP的更高，提示 M P较SP有更强的应激性!考虑到大鼠为群居动物，单只大鼠实验易导致与所在群体的隔离。为克服群体隔离所带来的应激反应，有学者将 M P 法进一步改良发展为改良多平台睡眠剥夺法!

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