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南京实验外包 英瀚斯 动物模型实验外包
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发布时间: 2020-07-25 02:01
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详细信息

实验进行前,动物模型实验外包,超净台用紫外灯照射30-60min,然后用75%酒精擦拭超净台台面,并开启超净台风扇运转10min左右再开始实验操作。

实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内;实验用品用完应移出超净台,以利于气流的流通。实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。

每次操作只处理一种细胞;即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基,避免细胞间的交叉污染。

预防细胞污染的注意事项

操作时小心取用无菌的物品,避免污染。勿碰触吸管尖头,不小心碰触后应立即更换;不要在打开的容器瓶口正上方操作,容器打开后,倾斜45°操作,操作完成后及时盖上瓶盖。

CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方,应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次,用双蒸水清洗,再用酒精棉球擦拭一遍,后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水(应每周更换),待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。

定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。










1、细菌:

识别:细菌在显微镜下为黑色细沙状,根据gan染细菌的不同,可有不同的外形。只要发现培养液浑浊变黄,培养瓶顶部有一层细沙一样的东西。就知道大事不好啦。

处理:可在培养液中加相应的抗sheng素处理。可以用四环素,庆大mei素,或者链mei素,前两者的工作浓度是50 μg/mL;链mei素的工作浓度是100 μg/mL。其实,毛毛虫说句实话,一旦发生污染,如果细胞不是特别特别珍贵的话,还是趁早扔了。

2、霉菌

识别:因为培养液是清亮的,所以霉菌污染非常难以早期发现,等发现时往往已经为时过晚了。培养液中慢慢地出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,如同风中柳絮。细胞仍可生长,但时间一长,细胞的状态就变差。

处理:细胞一旦被霉菌污染,很难挽救,建议果断舍弃该污染细胞,将环境消毒。

采用酒精底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新洁尔灭擦洗一遍。把水盘里加上饱和量的硫酸铜。

3、支原体:

识别:多为多边形,培养液一般会变浑浊。支原体细胞以后,细胞病变不很明显,实验外包哪家好,支原体污染后,可影响的细胞生长参数。故进行实验前,确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。

处理:没有什么好处理的。直接扔了吧。

4、黑蛟虫:

识别:据说是纳米级的细菌。低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去。培养液也是不浑的,一般不会太影响。但是如果太多了,也会影响细胞生长和实验结果。

处理:因为根本不知道这是什么物种,南京实验外包,所以也谈不上什么处理方式。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率。

5、真菌:

识别:真菌污染和霉菌污染差不多。一般培养液清亮,所以很难早期发现。镜下有时候象丝状,有时候象珊瑚状。慢慢地会长出很细的黑色丝状物。这个时候,实验外包服务,已经晚了,细胞很难救活了。

处理:同霉菌污染一样,没有什么好处理的,直接扔了吧。然后消毒灭菌培养间,CO2孵箱,器皿和培养液。



为什么结果重复不出来?待测试剂的问题?

  做实验时,实验结果的稳定和可重复性对进一步得出结论是非常重要的,然而现实中经常面临的却是数据的不稳定,明明按照预实验摸好的条件进行操作,每次的实验结果却有很大差异。面对这种情况,除严格按照检测步骤进行操作外,对待检试剂特性的充分了解有时可能成为解决问题的关键所在。

 ,注意待检试剂的分子量以及纯度。配制特定浓度溶液时计算要准确,并且要考虑称量的可行性,如需要称量的太少而天平的敏感度过低,会降低称量准确性,此时要先配制成高浓度的母液再进一步稀释。

 其次,注意待检试剂的溶解度。要了解试剂是脂溶性还是水溶性,溶解度是多少,如果是脂溶性而实验条件是要求在水相中,那么该加何种助溶剂或进行何种操作以助溶?例如某些多肽类物质由于含有较多的疏水性氨基酸,因而具有较强的疏水性,但常规生物体体内环境中多为水相环境,因此在使用此类试剂时应特别注意其溶解程度。一般难溶于水溶剂的试剂可先使用少量DMSO进行溶解,然后再一滴一滴慢慢加入水相溶剂中进行稀释,并辅助以超声处理助溶。再如测定cAMP实验时常用到的一种磷酸二酯酶的yi制剂IBMX,先使用DMSO进行溶解,但加入到水相溶剂中时就会析出,要使用沸水浴加热并摇晃均匀使其溶解于水溶剂。当需要使用梯度浓度的待检试剂进行研究时,要注意高浓度剂量组的试剂可以溶解。

 后,待检试剂的稳定性也非常重要。要清楚待检试剂在溶液中是否容易被降解,要了解活性物质在配成溶液后能活性能保持多久,对于不能保存太久的试剂应该现用现配。此外,要注意存放条件,了解是否可反复冻融等问题,对于不可反复冻融或需要避免污染的试剂,应按每次用量分装后保存。

 因此,实验开始前充分了解待检试剂的特性对实验结果的稳定性非常重要。


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